PCR儀溫度校準說明
瀏覽次數：2903發(fā)布日期：2020-09-22
PCR儀溫度校準說明
PCR儀溫度校準是一種用來放大特定的DNA時間段的儀器，主要采用的是半導體熱泵制冷技術以及膜加熱技術，保證了升溫速度的穩(wěn)定和快速。
PCR技術能快速地在體外試管內擴增目標基因或DNA時間段,是科研人員獲得目標DN時間片段的常用技術,在生物醫(yī)學領域得到廣泛的應用。PCR儀樣品塊的溫度精度和均勻性是影響PCR反應效果的重要因素。為了測量樣品塊的溫度均勻性及其它溫度參數,要求測量工具必須具有多個測量通道,且具有很佳的測量精度、響應速度、通道一致性和通道同步性。
關于PCR儀溫度校準的詳細說明：
（一）溫度準確性
溫度準確性是PCR儀重要的性能指標，如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增，甚錯誤的擴增結果，造成假陽性和假陰性。
市場上各家廠商考核基因擴增儀（PCR儀）性能的主要指標，一般廠家的企業(yè)指標為±0.5℃，一些性能較好的產品可以實現(xiàn)的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進行測試。
校準實驗平均溫度的計算公式為：I—參加檢測的溫度探頭序號；n—參加檢測的溫度探頭的數量
（二）溫場均勻性
由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結果偏差。一般PCR儀邊緣點的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產品可以實現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。
校準實驗時，通過選取孔板中16個特殊反應位置來測量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個探頭在同一時刻大溫度與小溫度的差值。均勻度計算公式為：tmax-tmin（tmax =大溫度；tmin =小溫度）
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PCR擴增產物數量的多少決定了PCR的效率。為了在短時間內獲得盡可能多的產物，需要儀器在升降溫段具有按照預設升降溫速率快速升溫和降溫的能力（大升溫速率達15~20℃）。一個完整的PCR過程，是由若干個升溫→恒溫→降溫循環(huán)構成的。因為“變性”，“退火”和“延伸”3個階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過程盡可能地迅速，才能縮短每個PCR循環(huán)以及整個PCR 過程所需時間。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。
PCR儀溫度校準實驗中，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時間。
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